Trevigen彗星实验全线产品,带你来看“彗星雨”!

发布者:艾美捷科技发布时间:2019-11-05

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彗星实验(Comet assay)也被称为单细胞凝胶电泳实验(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是一种在单细胞水平上检测DNA损伤的技术。当各种内源性和外源性 DNA 损伤因子诱发细胞 DNA 链断裂时,其超螺旋结构受到破坏,在细胞裂解液作用下,细胞膜、核膜等膜结构受到破坏,细胞内的蛋白质、RNA 以及其他成分均扩散到电解液中,而核DNA由于分子量太大不能进入凝胶而留在原位。电泳过程中,如果DNA没有损伤,则将停留在原位,染色后呈圆形的荧光团,无拖尾出现。如果DNA受损,断裂的碎片进入到凝胶中,在电场的作用下,DNA碎片离开原位向阳极迁移,形成拖尾。DNA受损越严重,断裂越多,产生的碎片就越多、越小,则向阳极迁移的DNA碎片量就越多,迁移距离也越长,荧光染色后就能看见“彗星”样尾长并且荧光强度增强。

 

彗星实验

 

目前有两种常见的彗星实验检测方式——碱性处理&中性处理。在碱性处理条件下,DNA发生变性,因而可检测包括单链及双链断裂在内的所有DNA 损伤;在中性处理条件下,DNA 维持双链构象,因而仅可以检测双链断裂。

 

实验大体流程如下:

 

  1. 制备单细胞悬浮液,在 37℃ 条件下,悬浮液与低熔点琼脂糖(LM琼脂糖)混合;
  2. 将琼脂糖、细胞混合物涂布在预处理的载玻片上;
  3. 4℃条件下用裂解液处理30-60min或过夜,裂解液由去垢剂及高盐溶液组成,可去除多余的细胞膜及组蛋白;
  4. 将载玻片浸入电泳溶液中;
  5. 进行凝胶电泳,随后,中和载玻片,待LM琼脂糖完全干燥后,用荧光染料染色,并于荧光显微镜下观察DNA损伤程度。

 

注:最常用的荧光染料是SYBR Gold,但荧光染料的观察需要荧光显微镜。如果选择银染,使用标准的光学显微镜观察即可。

 

图片处理

 

在拍照时以tif格式保存图片,然后用CASP彗星分析软件分析,如下图是软件打开的界面➙

 

CASP

 

接下来➙导入图片,用白色画框选中要分析的区域。下图中的“调整”项可以调整画框的位置以包含整个细胞,开始分析前要点击“开始”,然后点“分析”,再点“保存”,这样一张图的数据就分析完了,数据会保存在系统里。点击“翻页”可以继续分析下一张图。

 

彗星实验检测

 

分析完所有图片后导出数据到Excel表格,保留TailDNA%(尾部DNA百分含量),TailLength(尾长),TailMoment(尾矩)三列数据。根据细胞尾部的DNA百分含量(即TailDNA%),将采集的细胞图像分为5级:彗星尾部荧光强度(TailDNA%)占总强度为0-6%是0级;6.1%-17.0%是1级;17.1%-35.0%是2级;35.1%-60.0%是3级;60.1%-100.0%是4级。

 

彗星实验检测

 

彗星率等于彗星细胞数目(除去0级细胞)占总细胞数目的百分比。任意值等于各等级细胞的百分比与其对应的级别号的乘积之和,它可以综合反映细胞的DNA损伤情况。最后,综合分析Tail DNA%、Tail length、Tail moment、彗星率和任意值,共5个指标比较细胞的DNA损伤程度。

 

作为一家专注于开发细胞凋亡、DNA损伤和修复、肿瘤细胞功能与行为等相关研究产品的美国生物技术公司,Trevigen可为您提供彗星实验全线产品:

 

CometAssay®彗星分析专用

 

彗星分析专用玻片

 

货号

名称

规格

4250-004-03

CometSlide™(2 Well)

2孔样式玻片 * 2片

4250-050-03

CometSlide™(2 Well)

2孔样式玻片 * 25片

4250-200-03

CometSlide™(2 Well)

2孔样式玻片 * 100片

4252-040-01

CometSlide™(20 Well)

20孔样式玻片 * 2片

4252-200-01

CometSlide™(20 Well)

20孔样式玻片 * 10片

4252-500-01

CometSlide™(20 Well)

20孔样式玻片 * 20片

4252-02K-01

CometSlide™(20 Well)

20孔样式玻片 * 100片

4253-096-03

CometSlide™(96Well)

96孔样式玻片 * 1片

 

CometAssay® 彗星分析银染试剂盒

 

货号

名称

规格

4254-200-K

Silver Staining Components

200次银染分析

4251-050-K

CometAssay®Silver Kit

2孔样式玻片 * 25片和50次银染分析
备注: 包括4250-050-k(彗星实验试剂) + 4254-200-K(银染试剂)

 

CometAssay®彗星分析试剂盒

 

货号

名称

规格

4250-050-K

CometAssay® Kit (25 x 2 well slides)

50次分析

4252-040-K

CometAssay® Kit (2X20 well slides)

40次分析

4253-096-K

CometAssay® Kit (1X96 well slides)

96次分析

 

CometAssay®彗星电泳检测系统

 

彗星电泳检测系统

 

货号

名称

产品组分

4250-050-ES

CometAssay® Electrophoresis System

彗星电泳仪

4250-050-ESK

CometAssay® 2 Well ES Unit w/ Starter Kit

彗星电泳仪&25个2孔玻片式彗星分析试剂盒

4250-050-ESK-PS1

CometAssay® 20 Well ES Unit w/ Starter Kit and Power Supply

 

彗星电泳仪& 25个2孔玻片式彗星分析试剂盒&电源

4252-040-ESK

CometAssay® 20 Well ES Unit w/ Starter Kit

彗星电泳仪&25个2孔玻片彗星分析式试剂盒

4252-040-ESK-PS1

CometAssay® 20 Well ES Unit w/ Starter Kit plus NA Power Supply

彗星电泳仪& 2个20孔玻片式彗星分析试剂盒&电源

4253-096-ESK

CometAssay® 96 Well ES Unit w/ Starter Kit

彗星电泳仪&1个96孔玻片式彗星分析试剂盒

4253-096-ESK-PS1

CometAssay® 96 Well ES Unit w/ Starter Kit plus NA Power Supply

彗星电泳仪&电源与1个96孔玻片式彗星分析试剂盒

 

备注:以上套装电源为北美制氏电源,其他制氏类型电源(例如英国制式),详询艾美捷科技

 

除了以上试剂盒外,Trevigen还可单独提供彗星实验的各种试剂组分,例如:低熔点琼脂糖CometAssay® LMAgarose)细胞裂解液(CometAssay® Lysis Solution)

 

Trevigen是一家快速成长的美国生物技术公司,专注于细胞凋亡、DNA损伤和修复、肿瘤细胞功能与行为等方面研究的肿瘤研究产品和服务。作为 Trevigen在中国区域的总代理,艾美捷与Trevigen一道为中国的科研工作者提供最好、最新的氧化应激、细胞损伤和肿瘤细胞行为研究等领域内的 优质产品和技术服务。
如果您对上述产品及方案感兴趣,请致电400-6800-868至艾美捷科技购乐彩票垂询彗星实验的相关产品,或索取最新的产品资料。

 

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