Epigentek上新啦,5mC & 5hmC特定位点检测的PCR试剂盒!

发布者:艾美捷科技发布时间:2019-09-10

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        DNA甲基化是在DNA甲基化转移酶(DNA methytransferase,DNMT)的作用下,在基因DNA序列CpG二核苷酸的胞嘧啶5’-碳位共价结合一个甲基基团而形成5mC。5hmC是5mC的羟基化形式,1952年在噬菌体DNA中首次发现。研究发现5hmC是10-11易位(ten-eleven translocation,TET)家族蛋白通过氧化5mC产生的,进一步可被氧化为5fC和5caC。

 

5hmC

 

        与5mC相比,5hmC的含量更低,但5hmC也具有非常重要的生物学功能,研究表明,5hmC参与了基因表达的转录调控,并在DNA去甲基化过程中发挥重要作用。另外,5hmC可能与特定肿瘤的发生密切相关,有可能成为肿瘤早期诊断的生物标志物。因此掌握5hmC在基因组DNA中的定量和定位信息是非常必要的。但研究最初却面临着巨大的技术挑战:一方面是因为标准的生物化学方法不容易区分5mC和5hmC;另一方面是由于哺乳动物基因组中的胞嘧啶衍生物在胞嘧啶中所占的比例很低,因此精确检测其含量十分困难。

 

        传统的DNA甲基化特异性修饰位点的检测研究主要是通过重亚硫酸盐反应,将含有修饰位点的序列转化为正常DNA序列的过程。首先,对待测DNA进行重亚硫酸盐处理,未甲基化胞嘧啶(C)转化为尿嘧啶(U),PCR扩增后转化为胸腺嘧啶(T),而甲基化C不发生变化。通过与未处理DNA的序列进行比对,可以判断DNA的甲基化位点及覆盖程度。但这种方法不能区分5mC和5hmC,在重亚硫酸盐修饰过程中,甲基化的C包括5mC和5hmC,均保持不变,通过这种方法得到的所谓5mC其实是5mC与5hmC的集合,在后续的检测方法中也无法识别二者。

 

        Epigentek新推出了一套经过验证的BisulPlus Loci 5mC & 5hmC Detection PCR Kit, 可鉴定并检测5hmC和5mC。此试剂盒操作简便,只需三步:

 

        第一步:重亚硫酸盐转化待测DNA,未甲基化C转化为U,PCR扩增后转化为T,5mC不变,5hmC被转化为5-亚甲基磺酸胞嘧啶(CMS)

 

        第二步: APOBEC脱氨酶催化亚硫酸盐转化后的DNA,将5mC转化为T,而CMS不变,PCR扩增后仍为C。

 

5mC

input DNA

 

        第三步:通过qPCR分析比较处理和未处理的DNA序列,实现对DNA 5mC&5hmC甲基化的定量和定位检测。

 

qPCR分析对DNA 5mC&5hmC甲基化的定量和定位检测

 

货号 名称 规格
P-1067 BisulPlus Loci 5mC & 5hmC Detection PCR Kit 2*24reaction

 

        【产品特点】

 

  1.         同时检测:5hmC和5mC经DNA转化处理后,通过qPCR达到平行鉴定的目的
  2.         方法新颖:亚硫酸氢盐结合胞嘧啶脱氨酶(APOBEC)转化5mC,以达到鉴定5hmC的目的
  3.         高特异性:5hmC除了可以区别于5fC和5caC,也可与C和5mC区分开
  4.         反应灵活:可同时分别进行5hmC和5mC各24次鉴定反应,或仅5mC 48次反应
  5.         操作便捷:可在5小时内完成
  6.         转化率高:C- U转化率> 99%,5mC-T转化率> 95%
  7.         样品适用性广:起始材料可以是从各种组织/细胞样品中分离的基因组DNA

 

        Epigentek(美国)公司成立于2005年,是全球领先的表观遗传学研究相关产品的开发商和供应商。公司开发的综合产品线包含1100多种专利产品,为表观遗传学方面的研究和新药研发提供全面系统的解决方案。公司专业提供DNA甲基化试剂盒、组蛋白修饰相关试剂盒、染色质免疫沉淀试剂盒、基因表达与沉默试剂盒、DNA损伤及修复试剂盒、SUMO化修饰分析试剂盒、表型相关抗体等表观遗传学产品。

 

        艾美捷作为Epigentek的中国区域代理,将为客户提供完整的表观遗传解决方案,产品包括表观遗传研究用分析试剂盒、抗体以及相关的抑制剂/拮抗剂等产品。更多信息,欢迎垂询艾美捷科技购乐彩票!

 

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